Ензимен бромелаин на прах

● Използваме най-добрите суровини.

желатин ХраносмиланеСигестия единица Аналитичен Метод (GDU)

A. Цел:

Тази процедура се използва за определяне на протеолитичната активност наЕнзимен бромелаин на прах.

B. Оборудване:

1. pH метър

2. Водна баня с постоянна температура при 45,0 градуса ± 0,1 градуса

3. Аналитична везна

4. Мерителни колби

5. Обемни пипети

6. Таймер

7. Цифрова бюрета (Точност от 0,1 ml)

8. Аспиратор

9. Автоматични пипети

C. Безопасност Предпазни мерки: това тест трябва бъди изпълнени в на дим качулка.

1. Използвайте стандартни лабораторни практики за безопасност.

2. Формалдехид: Пригответе и дръжте в аспиратор през цялото време. Известен канцероген и тератоген.

3. Пероксид: Силен окислител

D. Реактиви и реагент препарати:

1. Дестилиран вода: приблизително 500 ml: коригирайте рН до 4,5 с 0,1 N HCI.

2. желатин субстрат:

а. Разтворете 25 грама желатин (Mikrobiologie. 1.04070) в 375 мл гореща вода, оставете да заври. Охлажда се до 45 градуса.

b. Коригирайте pH до 4,5 с 0,1 N HCI и разредете до 500 ml дестилирана вода с pH 4,5.

c. Поддържайте желатиновата основа на 45 градуса.

3. Буфер Решение:

а. Добавете бавно 15 g NaCl към 40-50 ml вода в чаша от 150 ml и разбъркайте, за да се разтвори.

b. Добавете 0,570 ml оцетна киселина.

c. Коригирайте pH до 4,5 с 0,2N HCL (обемът ще бъде по-голям от 100 ml.)

4. 3 % Водород пероксид:

а. Пипетирайте 2,5 ml 30% водороден прекис (изходен разтвор) в 25 ml обемен съд

колба и се разрежда до обем с дестилирана вода с pH 4,5

5. 37 % Формалдехид pH 9.0:

а. Коригирайте достатъчен обем (100 ml) формалдехид до pH 9,0 с 0,1 N NaOH (приблизително 20 mlбромелаинов ензим на прахформалдехид на проба преди регулиране на pH.)

6. 0.100 N NaOH: (Закупен стандартизиран)

а. Основен разтвор: стандартизиран при 0,100 N

E. Процедура:

1. Ензимен препарат:

а. Изчисляване на ензимния препарат

Тегло=100/целева активност (приблизително 0,05 g или 50 mg)

A. Претеглете точно ензима в мерителна колба от 50 ml

B. Добавете 8,3 ml буферен разтвор.

b. Оставете да престои 30 минути на стайна температура.

c. Разредете до 50 ml с дестилирана вода с рН 4,5, добавете малка бъркалка и разбъркайте за

допълнителни 10 до 15 минути

2. Ензимна процедура:

а. Пипетирайте 25 ml желатинов субстрат във всяка от две чаши от 100 ml, съдържащи бъркалки, и ги поставете във водна баня при 45 градуса за 5 минути, едната за тестовия разтвор, а другата за празния разтвор.

b. Тестово решение:

1) Добавете 1,0 ml отЕнзимен бромелаин на прахразтвор в бехерова чаша, предназначена за тестовия разтвор, започнете да измервате времето и завъртете.

2) След точно 20 минути инкубация при 45 градуса, добавете 0,1 ml 3% водороден пероксид и разбъркайте.

3) Инкубирайте още 5 минути.

4) Извадете чашата от водната баня и при непрекъснато разбъркване поставете pH сондата.

5) Запишете pH след 10 секунди (първоначално pH)

6) Коригирайте pH до 6,0 с 0,1 N NaOH. (Приблизително 2-4 ml)

*Забележка: Когато регулирате pH на 6,0, бъдете внимателни при pH 5,8; рН се повишава бавно и минималните добавки на NaOH в този момент ще повишат значително рН.

7) При непрекъснато разбъркване се добавят 10 ml 37 % формалдехид, рН 9,0.

8) Запишете pH след 10 секунди и 1 минута.

9) Титрува се до pH 9,0 с 0,1 N NaOH.

10) Запишете обема на титруване. Това е тестовият титър, Т.

c. Празен разтвор:

Празният разтвор трябва да се изпълнява едновременно с тестовия разтвор. Това се постига чрез започване на определянето на празния разтвор 12 минути след началото на тестовия разтвор. Това ви дава време да завършите анализа на тестовия разтвор, преди да се наложи да продължите с празния разтвор.

1) Добавете 0,1 ml 3 % водороден прекис към чашата, предназначена за празния разтвор, и разбъркайте.

2) След точно 20 минути инкубиране при 45 градуса добавете 1,0 ml отбромелаинов ензим на прахразтвор и завъртете.

3) Инкубирайте още 5 минути.